The Actin-Binding Protein Canoe/AF-6 Forms a Complex with Robo and Is Required for Slit-Robo Signaling during Axon Pathfinding at the CNS Midline

La guía axonal es un proceso clave durante el desarrollo y regeneración del sistema nervioso. Uno de los mejores paradigmas establecidos para el estudio de los mecanismos implicados en este proceso es la decisión axonal de cruzar o no cruzar la línea media en el SNC de Drosophila. Un regulador esencial de dicha decisión es la vía de señalización altamente conservada de Slit-Robo. Las señales de guía Slit actúan a través de receptores Robo para repeler axones de la línea media. A pesar del gran avance en nuestro conocimiento de estas proteínas, los mecanismos intracelulares asociados con la función de Robo no están bien definidos. En este trabajo demostramos que la proteína Canoe (Cno), el ortólogo en Drosophila de AF-6/Afadin, es esencial para la señalización de Slit-Robo. Cno se expresa en axones pioneros longitudinales, y axones longitudinales positivos para Robo/Fasciclina2 cruzan de forma aberrante la línea media en embriones mutantes para cno. Neuronas primarias mutantes para cno muestran una reducción significativa de Robo en los filopodios de los conos de crecimiento y Cno forma un complejo in vivo con Robo. Además, el fenotipo commissureless (comm) (pérdida de comisuras debido a la presentación constitutiva de Robo en la superficie de todas las neuronas) se suprime en embriones dobles mutantes comm, cno. Interacciones genéticas específicas entre cno, slit, robo, y genes que codifican otros componentes de la vía Robo, tales como Neurexin-IV, Syndecan, y las GTPasas Rac, terminan de confirmar la relación funcional de Cno con la vía de Slit-Robo. Nuestros datos apoyan el hecho de que Cno es un nuevo regulador de la vía de señalización de Slit-Robo, crítico para regular la localización subcelular de Robo y para transducir su señalización al citoesqueleto de actina durante la guía axonal en la línea media.